产品目录

IP组织细胞蛋白裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞和组织的裂解液。能裂解细胞并充分释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能。本裂解液裂解的细胞和组织样本，主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀等。

本裂解液不含有离子型去垢剂组分，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白之间原有的相互作用的破坏，提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。

• 使用方便，从细胞，组织提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 总蛋白提取液含多种有效成分，可充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑混合物不可以一次加入提取液。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 细胞裂解
  
  • 裂解液制备：
    每1mL冷的IP组织细胞裂解液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
    
    • 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂。
      
    • 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶、磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。
  • 取5～10×10⁶个细胞，在4℃，1000×g条件下离心5～10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
    
    • 细胞可以收集后裂解，也可以直接原位裂解，根据操作习惯选择。
  • 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
    
  • 每5×10⁶个细胞中加入500μL冷的裂解液，混匀后，在4℃条件下振荡15～20分钟。
    
    • 每10⁶个细胞，大约10mg或10μL沉淀，加入100μL裂解液。大约相当于6孔板的每孔加入100μL～150μL，或1个75cm2培养瓶加1mL。裂解液和细胞应充分接触。如果裂解液不足量，细胞裂解效率将会降低。
  • 在4℃，12000～14000×g条件下离心15分钟。
    
  • 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
• 组织裂解
  
  • 裂解液制备：
    每1mL冷的IP组织细胞裂解液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
    
    • 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂。
      
    • 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶、磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。
  • 取100mg组织样本用手术剪刀剪碎，加入1mL裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
    
    • 如果组织样品很细小，可剪碎后直接加入提取液振荡15分钟，可以不用匀浆器。
      
    • 一般按组织：提取液用量1:10（w/v）左右加入提取液即可。如果需要提高得到的蛋白样品浓度，可以将组织：提取液用量比例调整为1:5.
      
    • 也可用液氮研磨的方法。
  • 将组织匀浆液在4℃振荡15～25分钟。
    
  • 在4℃，12000～14000×g条件下离心15分钟。
    
  • 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
    上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
    
    • 建议用BCA法进行蛋白定量。
      
    • 蛋白蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 细胞裂解速度慢？
  为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组分，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取时出现胶状沉淀？
  蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组分，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。